Cách sử dụng và biện pháp phòng ngừa ống ly tâm siêu lọc
1) Chọn ống siêu lọc phù hợp.Lưu ý rằng màng UF khác nhau về mức độ chịu đựng các loại hóa chất khác nhau.Thông thường, các ống siêu lọc có giới hạn trọng lượng phân tử 10 kDa có thể được chọn với giới hạn trọng lượng phân tử không được lớn hơn 1/3 trọng lượng phân tử của protein quan tâm, chẳng hạn như 35 kDa.Nếu trọng lượng phân tử của protein quan tâm là khoảng 10 kd, có thể sử dụng ống siêu lọc có trọng lượng phân tử giới hạn là 3 KD.
(2) Thiết bị siêu lọc mới mua ở trạng thái khô, được thêm nước siêu tinh khiết trước khi sử dụng và nước hoàn toàn đi qua màng, bồn nước đá hoặc tủ lạnh trước khi làm lạnh trong vài phút.Sau đó, nước được đổ đi, tức là chất lỏng protein và được thêm vào bao nhiêu, tùy theo giá trị nào không nhiều hơn vạch trắng ở đầu ống.Quá trình thực hiện nhẹ nhàng và ống siêu lọc cần được làm lạnh trước trên đá trước khi thêm dung dịch protein.
3) Cả khối lượng và trọng tâm đều đạt đến trạng thái cân bằng.Lưu ý tốc độ quay và gia tốc không được nhanh lắm nếu không sẽ trực tiếp làm hỏng màng siêu lọc.Quá trình siêu lọc ly tâm đã được bắt đầu (máy ly tâm được làm lạnh trước ở 4 độ).Sau khi RPM của các máy ly tâm khác nhau được chuyển đổi thành g, nó sẽ khác.Gia tốc của máy ly tâm được điều chỉnh ở mức tối thiểu, làm giảm áp lực lên màng.Lưu ý, hãy nhớ rời khỏi máy ly tâm sau khi máy ly tâm đã đạt tốc độ đích, nếu không nếu gặp sự cố thì lần đầu tiên bạn sẽ không thể xử lý được.Sự định hướng của màng với trục chính được điều chỉnh theo hướng dẫn (trường hợp máy ly tâm góc là màng vuông góc với trục).Trong sử dụng thực tế, tốc độ quay chung thấp hơn tốc độ trong hướng dẫn, do đó có thể kéo dài tuổi thọ của ống ly tâm.
3) Cả khối lượng và trọng tâm đều đạt đến trạng thái cân bằng.Lưu ý tốc độ quay và gia tốc không được nhanh lắm nếu không sẽ trực tiếp làm hỏng màng siêu lọc.Quá trình siêu lọc ly tâm đã được bắt đầu (máy ly tâm được làm lạnh trước ở 4 độ).Sau khi RPM của các máy ly tâm khác nhau được chuyển đổi thành g, nó sẽ khác.Gia tốc của máy ly tâm được điều chỉnh ở mức tối thiểu, làm giảm áp lực lên màng.Lưu ý, hãy nhớ rời khỏi máy ly tâm sau khi máy ly tâm đã đạt tốc độ đích, nếu không nếu gặp sự cố thì lần đầu tiên bạn sẽ không thể xử lý được.Sự định hướng của màng với trục chính được điều chỉnh theo hướng dẫn (trường hợp máy ly tâm góc là màng vuông góc với trục).Trong sử dụng thực tế, tốc độ quay chung thấp hơn tốc độ trong hướng dẫn, do đó có thể kéo dài tuổi thọ của ống ly tâm.
(4) Khi cô đặc đến 1ml còn lại, lấy 50ul dung dịch đệm, thêm 10ul chảy qua xem có màu xanh lam không, để nhận định ống siêu lọc có thiếu protein hay không.Nếu ống bị rò rỉ, hãy đổ lại lớp trên và chảy qua ống mới để bắt đầu quá trình siêu lọc.Để xác định chính xác xem các ống có bị bỏ sót hay không, hãy ly tâm trong 10 phút với 5mgml BSA trước khi cho chảy qua, chạy bằng keo protein hoặc xét nghiệm thô Bradford và tiếp tục bằng cách thêm dung dịch protein đậm đặc còn lại (hoạt động trên đá và ngăn chặn protein bị nóng lên) cho đến khi tất cả các chất cô đặc đã được thêm vào.Cẩn thận trong quá trình ly tâm nếu xảy ra hiện tượng kết tủa protein, dẫn đến đóng ống.Nếu kết tủa xảy ra, hãy xác định xem nguyên nhân cụ thể gây kết tủa là do nồng độ protein quá cao hay chất đệm không phù hợp;Vấn đề trước có thể được giải quyết bằng cách siêu lọc nhiều ống siêu lọc đồng thời, làm giảm nồng độ và vấn đề thứ hai bằng cách trao đổi các dung dịch đệm khác nhau cho đến khi không xảy ra kết tủa protein.
(4) Khi cô đặc đến 1ml còn lại, lấy 50ul dung dịch đệm, thêm 10ul chảy qua xem có màu xanh lam không, để nhận định ống siêu lọc có thiếu protein hay không.Nếu ống bị rò rỉ, đổ lại lớp trên và chảy qua ống mới để bắt đầu quá trình siêu lọc.Để xác định chính xác xem các ống có bị bỏ sót hay không, hãy ly tâm trong 10 phút với 5mgml BSA trước khi cho chảy qua, chạy bằng keo protein hoặc xét nghiệm thô Bradford và tiếp tục bằng cách thêm dung dịch protein đậm đặc còn lại (hoạt động trên đá và ngăn chặn protein bị nóng lên) cho đến khi tất cả các chất cô đặc đã được thêm vào.Cẩn thận trong quá trình ly tâm nếu xảy ra hiện tượng kết tủa protein, dẫn đến đóng ống.Nếu kết tủa xảy ra, hãy xác định xem nguyên nhân cụ thể gây kết tủa là do nồng độ protein quá cao hay chất đệm không phù hợp;Vấn đề trước có thể được giải quyết bằng cách siêu lọc nhiều ống siêu lọc đồng thời, làm giảm nồng độ và vấn đề thứ hai bằng cách trao đổi các dung dịch đệm khác nhau cho đến khi không xảy ra kết tủa protein.
(5) Một số bước đầu tiên được sử dụng để cô đặc protein và nếu thay đổi dung dịch đệm, hãy nhẹ nhàng thêm dung dịch đệm mới (siêu lọc qua màng siêu lọc 0,22um) vào khoảng 1ml tổng lượng protein và cô đặc lại thành khoảng 1ml trong ba bước. lần liên tiếp, với khối lượng cô đặc cuối cùng tùy thuộc vào nồng độ protein mong muốn, thường không quá 500ul, nhưng cũng trong vòng 200ul.Đạt được 1000 × trở lên trong ba lần, về cơ bản là thay đổi bộ đệm nhiều như vậy, được tính bằng cách làm giàu khối lượng ít nhất 10 × hoặc hơn mỗi lần.
(5) Một số bước đầu tiên được sử dụng để cô đặc protein và nếu thay đổi dung dịch đệm, hãy nhẹ nhàng thêm dung dịch đệm mới (siêu lọc qua màng siêu lọc 0,22um) vào khoảng 1ml tổng lượng protein và cô đặc lại thành khoảng 1ml trong ba bước. lần liên tiếp, với khối lượng cô đặc cuối cùng tùy thuộc vào nồng độ protein mong muốn, thường không quá 500ul, nhưng cũng trong vòng 200ul.Đạt được 1000 × trở lên trong ba lần, về cơ bản là thay đổi bộ đệm nhiều như vậy, được tính bằng cách làm giàu khối lượng ít nhất 10 × hoặc hơn mỗi lần.
Thời gian đăng: Nov-09-2022