Phản ứng chuỗi polymerase, viết tắt làPCRtrong tiếng Anh, là một kỹ thuật sinh học phân tử dùng để khuếch đại các đoạn DNA cụ thể.Nó có thể được coi là một sự sao chép DNA đặc biệt bên ngoài cơ thể, có thể làm tăng đáng kể một lượng DNA rất nhỏ.Trong suốt thời gianPCRTrong quá trình phản ứng, một loại chất đóng vai trò quan trọng – enzyme.
1. Taq DNA
Trong các thí nghiệm vào những ngày đầu củaPCR, các nhà khoa học đã sử dụng Escherichia coli DNA polymerase I, nhưng có một vấn đề với enzyme này: nó cần bổ sung enzyme mới mỗi khi thực hiện một chu kỳ, điều này khiến các bước vận hành hơi phức tạp và khó khuếch đại hoàn toàn tự động.Vấn đề này đã được giải quyết sau khi các nhà khoa học vô tình phân lập được Taq DNA polymerase từ Thermus Aquas vào năm 1988. Kể từ đó, việc khuếch đại DNA tự động đã trở thành hiện thực.Việc phát hiện ra enzyme này cũng làm choPCRcông nghệ một công nghệ thuận tiện, thiết thực và phổ quát.Hiện nay, Taq DNA polymerase là loại polymerase phổ biến nhất trong bộ DNA.
2. PfuDNA
Như đã đề cập ở trên, Taq DNase gặp một lỗi lớn nên các nhà khoa học đã sửa đổi Taq DNA polymerase ở một mức độ nhất định để tránh hiện tượng khuếch đại không đặc hiệu do không khớp dẫn đến kết quả xét nghiệm không chính xác.Nhưng việc sửa đổi Taq DNA polymerase có thể ức chế hoạt động của DNA polymerase ở nhiệt độ phòng.PfuDNA polymerase có thể bù đắp tốt những nhược điểm trên của Taq DNA polymerase, nhờ đó phản ứng PCR có thể được thực hiện bình thường và tỷ lệ khuếch đại gen mục tiêu thành công có thể được cải thiện một cách hiệu quả.
3. Phiên mã ngược
Enzyme phiên mã ngược được phát hiện vào năm 1970. Enzyme này sử dụng RNA làm khuôn mẫu, dNTP làm cơ chất, tuân theo nguyên tắc ghép cặp bazơ và tổng hợp chuỗi đơn DNA bổ sung cho khuôn mẫu RNA theo hướng 5′-3′.Enzyme sao chép ngược chủ yếu phụ thuộc vào hoạt động DNA polymerase từ các mẫu DNA hoặc RNA và do đó không có hoạt động exonuclease 3′-5′.Tuy nhiên, nó có hoạt tính RNase H, làm hạn chế độ dài tổng hợp của enzyme phiên mã ngược ở một mức độ nhất định.Do độ trung thực và khả năng điều nhiệt thấp của enzyme phiên mã ngược hoang dã nên các nhà khoa học cũng đã sửa đổi nó.
VìPCRthí nghiệm, vật tư tiêu hao chính là:ống PCR riêng lẻ, ống PCR 4/8 dải, tấm PCR.
của LabioVật tư PCRcó những điều sau đâythuận lợi:
Đĩa PCR: Khả năng tương thích chu trình nhiệt rộng;Độ tương phản cao, nhận dạng giếng dễ dàng;phản xạ huỳnh quang tốt; tốttruyền nhiệt;Các chất ức chế DNase, RNase, DNA, PCR được chứng nhận và đã được thử nghiệm không chứa pyrogen.
Ống PCR riêng lẻ: Chống bay hơi; tốttruyền nhiệt;độ rõ quang học tuyệt vời;Được chứng nhận DNase, RNase, DNA, chất ức chế PCR và đã được thử nghiệm không chứa pyrogen.
Ống PCR 4/8 dải: Tường siêu mỏng, độ trong cao, phản xạ huỳnh quang tốt;có thể sử dụng trong ngành dược phẩm, công nghiệp thực phẩm và sinh học phân tử; vật liệu PP nguyên chất, chất lượng cao; DNase, RNase, DNA, chất ức chế PCR được chứng nhận và không chứa pyrogen đã được thử nghiệm.
Thời gian đăng: Jun-09-2023